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【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

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第二级 初级学士

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发表于 2010-8-19 16:43:20 |显示全部楼层
高效液相色谱仪(PLC) 是分析实验室常用的测试仪器之一,也是我们新药开发过程中很重要的一个技术手段,其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。因此,希望开辟这样一个讨论区,有经验的朋友可以来此介绍一下在PLC使用过程中的一些心得,大家也可以收集一些关于PLC使用过程中需注意问题的资料来此发表,目的只有一个:就是希望更多的朋友能从中有所收获,真正的使用好PLC这个工具。欢迎大家讨论!

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小婵婵  很给力  发表于 2014-8-31 16:41
giaour8834  给力  发表于 2013-8-21 09:33
lsh20040903  居家出行,必备良册  发表于 2011-10-20 12:37
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第三级 中级学士

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发表于 2010-8-19 19:58:45 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

嗯!PLC是常用的仪器,与它打交道的人很多,遇到的问题一定不少,好注意!
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第二级 初级学士

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发表于 2010-8-19 23:14:10 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

PLC为广大药学工作者日常工作中必不可少的仪器之一,由于其精度较高,对实验人员和实验室条件要求较高,因此保养也很重要,应引起注意:

液相色谱仪(hplc)的保养

  
     1.PLC的日常操作条件: 温度:10—30℃; 相对湿度
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第三级 中级学士

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发表于 2010-8-20 02:29:35 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

PLC六通阀进样器的使用及保养

  
     六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器,它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用,各大PLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。
     
     工作原理:
     1、手柄位进样(Load)位置时,样品经微量进样针从进样孔注射进定量环,定量环充满后,多余样品从放空孔排出;
     2、将手柄转动至进样(Inject)位置时,阀与液相流路接通,由泵输送的流动相冲洗定量环,推动样品进入液相分析柱进行分析。
     虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点,但正确的使用和维护将能增加使用寿命,保护周边设备,同时增加分析准确度。如使用得当的话,六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。
     
     以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考):
     1、手柄处于Load和Inject之间时,由于暂时堵住了流路,流路中压力骤增,再转到进样位,过高的压力在柱头上引起损坏,所以应尽快转动阀,不能停留在中途。在PLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱,是平头注射器。一方面,针头外侧紧贴进样器密封管内侧,密封性能好,不漏液,不引入空气;另一方面,也防止了针头刺坏密封组件及定子。
     2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时,进样量最多为定量环体积的75%,如20gL的定量环最多进样15p,L的样品,并且要求每次进样体积准确、相同;使用完全装液法进样时,进样量最少为定量环体积的3至5倍,即20gL的定量环最少进样60至1001aL的样品,这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液,达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。
     3、可根据进样体积的需要自已制作定量环,一般不要求精确计算定量环的体积,譬如,一根名义上10gL的定量环,实际是9gL还是1lgL并不重要,因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致,在计算结果时误差都被抵消了。
     4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质,样品溶液均要用0.45~tm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中,每次结束后应冲洗进样器,通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗,在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗,再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。

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彪宝宝  赞  发表于 2018-9-30 12:33
df1937  说的挺详细的  详情 回复 发表于 2012-10-14 10:03
beesyang  很有用啊啊  发表于 2012-9-4 11:09
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第二级 初级学士

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发表于 2010-8-20 05:45:00 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

色谱柱的维护   
   

     更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)
     
     注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
     1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端
     2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧
     3.一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网
     4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料
     5.将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平
     6.照(左图)装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端
     7.柱芯顶端套上2,然后参照(左图)将滤网放入
     8.压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平
     
     平衡色谱柱  反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
       硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
     
     如何平衡色谱柱?
       平衡过程中,将流速缓慢地提高
       用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)
     
     
     色谱柱的再生   进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
     
     表1 建议用来冲洗的溶剂体积
     色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
     125-4 1.6ml 30ml
     250-4 3.2ml 60ml
     250-10 -20ml 400ml
     请根据下表选择您的再生方法:
     极性固定相(如Si,N2*,DIOL基色谱填料)的再生:
     正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
     非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:
     水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水
     0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
     
     注意:
     在对N2改性的色谱柱进行再生时,由于N2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
     **如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
     
     色谱柱的维护
     1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
     2.大多数反相色谱柱的p稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的p范围
     3.避免流动相组成及极性的剧烈变化
     4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理
     5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存大乙腈中
     6.压力升高是需要更换预柱的信号
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发表于 2010-8-20 09:00:25 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

感谢整理!

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无名730625  HPLC是制药行业中必不可少的仪器之一,应用也比较多,对由于其精度较高,仪器的维护好可以提高仪器的寿命。对仪器的维护主要几部分:色谱柱 进样器 输送泵等。 色谱柱最好有预柱,样品处理好。流动相脱气,净化处理  详情 回复 发表于 2012-4-6 11:13
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第六级 药家博士

签到天数: 1 天

发表于 2010-8-20 12:15:50 |显示全部楼层
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第二级 初级学士

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发表于 2010-8-20 15:31:15 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

PLC 故障及排除方法

PLC 故障及排除方法.doc

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小婵婵  真的很不多啊啊  详情 回复 发表于 2014-9-1 14:26
gxmyt  看不了啊,也下载不了啊  详情 回复 发表于 2012-3-10 11:23
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第三级 中级学士

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发表于 2010-8-20 18:46:40 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

色谱柱的维护

1.色谱柱的清洗和再生方法.pdf

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hanlili  怎么下载啊  详情 回复 发表于 2012-4-25 19:05
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第三级 中级学士

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发表于 2010-8-20 22:02:05 |显示全部楼层

RE:【讨论】HPLC的使用及维护(欢迎大家讨论)

色谱柱的维护

2.污染填料后对色谱柱的处理过程.pdf
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